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Wie man eine Phosphatpufferlösung herstellt

Wie man eine Phosphatpufferlösung herstellt

Das Ziel einer Pufferlösung besteht darin, einen stabilen pH-Wert aufrechtzuerhalten, wenn eine kleine Menge Säure oder Base in eine Lösung eingeführt wird. Eine Phosphatpufferlösung ist ein praktischer Puffer. insbesondere für biologische Anwendungen. Da Phosphorsäure mehrere Dissoziationskonstanten aufweist, können Sie Phosphatpuffer in der Nähe eines der drei pH-Werte herstellen, die bei 2,15, 6,86 und 12,32 liegen. 1 Der Puffer wird am häufigsten unter Verwendung von Mononatriumphosphat und seiner konjugierten Base Dinatriumphosphat hergestellt.

 

Phosphatpuffermaterialien

  • Mononatriumphosphat
  • Dinatriumphosphat
  • Wasser
  • Phosphorsäure, um den pH-Wert saurer zu machen, oder Natriumhydroxid. um den pH-Wert alkalischer zu machen
  • pH-meter
  • Glaswaren
  • Kochplatte mit Rührstab

 

Bereiten Sie den Phosphatpuffer vor

    1. Entscheiden Sie sich für die Konzentration des Puffers. Wenn Sie eine konzentrierte Pufferlösung herstellen, können Sie diese nach Bedarf verdünnen.
    2. Entscheiden Sie sich für den pH-Wert Ihres Puffers. Dieser pH-Wert sollte innerhalb einer pH-Einheit vom pKa der Säure / Konjugat-Base liegen. Sie können also beispielsweise einen Puffer mit einem pH-Wert von 2 oder 7 herstellen, der jedoch durch einen pH-Wert von 9 gedrückt wird.
    3. Verwenden Sie die Henderson-Hasselbach- Gleichung, um zu berechnen, wie viel Säure und Base Sie benötigen. Sie können die Berechnung vereinfachen, wenn Sie 1 Liter Puffer erstellen. Wählen Sie den pKa-Wert, der dem pH-Wert Ihres Puffers am nächsten kommt. Wenn Sie beispielsweise möchten, dass der pH-Wert Ihres Puffers 7 beträgt, verwenden Sie das
      Verhältnis pKa von 6,9: pH=pKa + log ([Base] / [Säure]) von [Base] / [Säure]=1,096.
      Die Molarität von Der Puffer ist die Summe der Molaritäten der Säure und der konjugierten Base oder die Summe von [Säure] + [Base]. Für einen 1 M- Puffer (ausgewählt, um die Berechnung zu vereinfachen) ist [Säure] + [Base]=1.
      [Base]=1 – [Säure].
      Setzen Sie dies in das Verhältnis ein und lösen Sie:
      [Base]=0,523 Mol / l.
      Löse nun nach [Säure]: [Base]=1 – [Säure], also [Säure]=0,477 Mol / l.

 

  1. Bereiten Sie die Lösung vor, indem Sie 0,477 Mol Mononatriumphosphat und 0,523 Mol Dinatriumphosphat in etwas weniger als einem Liter Wasser mischen.
  2. Überprüfen Sie den pH-Wert mit einem pH-Meter und stellen Sie den pH-Wert nach Bedarf mit Phosphorsäure oder Natriumhydroxid ein.
  3. Sobald Sie den gewünschten pH-Wert erreicht haben, fügen Sie Wasser hinzu, um das Gesamtvolumen des Phosphorsäurepuffers auf 1 l zu bringen.
  4. Wenn Sie diesen Puffer als Stammlösung hergestellt haben. können Sie ihn verdünnen, um Puffer in anderen Konzentrationen wie 0,5 M oder 0,1 M herzustellen.

 

Vor- und Nachteile von Phosphatpuffern

Die beiden Hauptvorteile von Phosphatpuffern sind, dass Phosphat in Wasser gut löslich ist und eine extrem hohe Pufferkapazität aufweist. Diese können jedoch in bestimmten Situationen durch bestimmte Nachteile ausgeglichen werden.

  • Phosphate hemmen enzymatische Reaktionen.
  • Phosphat fällt in Ethanol aus, daher kann es nicht in Präparaten zur Ausfällung von DNA oder RNA verwendet werden.
  • Phosphate binden zweiwertige Kationen (z. B. Ca 2+ und Mg 2+ ).

 

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